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北航常凌乾團(tuán)隊(duì)《Small Methods》:一種納米電穿孔-DNA張力傳感系統(tǒng)并通過(guò)細(xì)胞力信息評(píng)估癌癥耐藥性

來(lái)源:      2023-11-30
導(dǎo)讀:體外藥物評(píng)估在新藥開(kāi)發(fā)領(lǐng)域具有加速藥物篩選、提高藥物安全性的作用,對(duì)個(gè)體化醫(yī)療具有重要意義。但傳統(tǒng)藥物評(píng)估過(guò)程中,藥物遞送方法依賴于細(xì)胞和藥物的共同培養(yǎng),藥物分子通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散的方式被細(xì)胞內(nèi)化(>數(shù)小時(shí))和細(xì)胞活力測(cè)量(>1天)的限制,這構(gòu)成了臨床藥物篩選和開(kāi)發(fā)的障礙。因此,快速、準(zhǔn)確地藥物評(píng)估的新技術(shù)仍具有廣泛的需求。

北京航空航天大學(xué)常凌乾課題組在《Small Methods(IF: 12.4)期刊上發(fā)表了 “A Nano-electroporation-DNA tensioner platform enhances intracellular delivery and mechanical analysis towards rapid drug assessment” 的研究文章。

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在這項(xiàng)工作中報(bào)告了一種納米電穿孔-DNA張力傳感生物芯片,由納米電穿孔遞送模塊和DNA張力傳感檢測(cè)模塊組成。兩模塊之間通過(guò)拼圖式的結(jié)構(gòu)組裝,增強(qiáng)了器件的靈活性,允許模塊的獨(dú)立設(shè)計(jì)和替換,提供個(gè)性化定制的可能,以及支持系統(tǒng)的擴(kuò)展和升級(jí) (圖1)。

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圖1. 納米電穿孔-DNA張力傳感生物芯片的原理示意圖。

為驗(yàn)證納米電穿孔介導(dǎo)的藥物輸送的速度、效率和安全性,首先建立了一個(gè)細(xì)胞物理模型,分析了納米通道上細(xì)胞周圍的電場(chǎng)和電勢(shì)分布(圖2a-c)。結(jié)果顯示,當(dāng)施加的系統(tǒng)電壓在10V~40V范圍內(nèi)時(shí),會(huì)產(chǎn)生>1V的跨膜電勢(shì)(細(xì)胞膜內(nèi)外的電勢(shì)差),成功地在細(xì)胞膜上進(jìn)行了電穿孔。與此同時(shí),納米通道具有聚焦電場(chǎng)的功能(圖2b),確保在低電壓下有足夠的電泳力將藥物分子推入細(xì)胞內(nèi)。隨后驗(yàn)證了納米電穿孔遞送模塊較高的安全性(98%)和高效的遞送效率(90%)(圖2d-f,同時(shí)將細(xì)胞內(nèi)遞送速度提高了103倍,藥物內(nèi)化時(shí)間縮短至~3秒。

在納米電穿孔遞送模塊完成藥物遞送后,細(xì)胞被消化后沿著微流道進(jìn)入DNA張力傳感器模塊。該DNA張力傳感器通過(guò)修飾的膽固醇自發(fā)地嵌入細(xì)胞膜。在藥物的刺激作用下,一旦細(xì)胞力學(xué)變化超過(guò)DNA張力傳感器預(yù)設(shè)的力的閥值,DNA張力傳感器發(fā)生結(jié)構(gòu)性變化,導(dǎo)致熒光信號(hào)的產(chǎn)生。通過(guò)分析細(xì)胞力學(xué)特性的變化情況進(jìn)而分析細(xì)胞的活性。在此,我們使用DNA張力傳感器模塊評(píng)估了在不同濃度(0、20、40、60和80 μg/mL)下紫杉醇藥效。其結(jié)果和CCK-8試驗(yàn)對(duì)于細(xì)胞存活率的定量結(jié)果一致,確認(rèn)了這一DNA張力傳感器用于細(xì)胞存活評(píng)估的可靠性(圖2g-h。

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圖2生物芯片用于藥物遞送的高速、高效和安全性驗(yàn)證,以及藥物評(píng)估的可行性驗(yàn)證。

最后,以抗腫瘤藥物DOX作為藥物模型,并采用A549細(xì)胞(人類非小細(xì)胞肺癌)作為細(xì)胞模型進(jìn)一步驗(yàn)證了NDT平臺(tái)的功能性。結(jié)果顯示,NDT介導(dǎo)的藥物遞送,在1分鐘內(nèi)可觀察到DOX(紅色熒光信號(hào))被成功遞送進(jìn)細(xì)胞內(nèi)(圖3a-b)。而且,在同一藥物濃度的情況下,基于納米電穿孔技術(shù)的NDT平臺(tái)能有效地提高了細(xì)胞的藥物內(nèi)化率。同時(shí),DNA張力傳感器模塊能夠以熒光信號(hào)的強(qiáng)弱直接、快速(<30分鐘)地反映藥物刺激下細(xì)胞活性的變化情況(圖3c-e)。而傳統(tǒng)試驗(yàn)需要> 24小時(shí)才能進(jìn)行一輪藥物評(píng)估。研究結(jié)果證明了該平臺(tái)具有高速、高效和安全性,是一種簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的臨床藥物篩選工具。

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3. 生物芯片功能驗(yàn)證。

該研究工作通訊作者為北航常凌乾教授,北航助理教授董再再為共同通訊作者。第一作者是北航博士研究生杭欣欣、北航碩士研究生黃兆存、北航碩士研究生何詩(shī)琦。文章第一單位為北航生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院和生物醫(yī)學(xué)工程高精尖創(chuàng)新中心。

文章鏈接:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/smtd.202300915



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