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蛋白質(zhì)是生命的基礎物質(zhì)，在合成、催化和信號傳感等所有生命活動中均承擔著重要的功能。因此，開發(fā)一種可靠、高效的蛋白質(zhì)測序技術(shù)對于理解生命過程和揭示疾病機理而言至關(guān)重要。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)測序方法，如質(zhì)譜法、Edman降解法，雖為蛋白質(zhì)領(lǐng)域做出了巨大貢獻，但其在檢測限和動態(tài)范圍方面存在較大局限性，無法完全滿足現(xiàn)實應用的需求，尤其是在低豐度蛋白質(zhì)標志物的檢測方面。因此，如果能在單分子水平上實現(xiàn)蛋白質(zhì)的測序，將為檢測低豐度蛋白和實現(xiàn)單細胞蛋白質(zhì)組學提供極高的靈敏度，并大大推動相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。

納米孔測序技術(shù)是近年來新興的一種單分子測序技術(shù)，已在DNA和RNA測序方面取得了巨大成功，這也激勵著研究者們對于蛋白質(zhì)或多肽納米孔測序的嘗試。但是多肽納米孔測序的實現(xiàn)面臨著諸多挑戰(zhàn)，其中一個主要的困難是如何實現(xiàn)多肽在納米孔中可控的棘輪運動，而這主要受限于目前沒有合適的多肽測序酶。

“納米孔錯位測序技術(shù)（Nanopore-Induced Phase-Shift Sequencing, NIPSS）”是近年來由南京大學化學化工學院黃碩課題組原創(chuàng)開發(fā)的一種新型測序技術(shù)，作為一種通用的測序技術(shù)，NIPSS已經(jīng)成功實現(xiàn)了除DNA外其他生物大分子的測序，如非天然核酸（XNA）和microRNA的直接測序。在此工作中，南京大學化學化工學院黃碩課題組使用NIPSS技術(shù)成功展示了多肽的納米孔測序技術(shù)原型（圖1）。

圖1：基于NIPSS的多肽納米孔測序技術(shù)原型展示。

為了驗證NIPSS技術(shù)進行多肽測序的可行性，我院黃碩課題組構(gòu)建了多肽-DNA嵌合鏈（圖1 A）。嵌合鏈的DNA部分為“驅(qū)動鏈”，在NIPSS檢測過程中（圖1B），DNA測序酶通過拉動DNA部分實現(xiàn)了整條多肽-DNA嵌合鏈在納米孔中的可控棘輪運動，從而實現(xiàn)了多肽的納米孔直接讀取。多肽的NIPSS信號表現(xiàn)出高度的一致性和序列相關(guān)性，由單氨基酸替換引起的電流變化也能被清楚地檢測到。通過將多肽的N端或C端與DNA驅(qū)動鏈進行偶聯(lián)，我院黃碩課題組也成功實現(xiàn)了對多肽兩端氨基酸序列信息的讀取。

該工作以“Single molecule ratcheting motion of peptides in a Mycobacterium smegmatis porin A (MspA) nanopore”為題，于2021年7月28日在《Nano Letters》發(fā)表相關(guān)論文（DOI：10.1021/acs.nanolett.1c02371，文章鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.nanolett.1c02371）。我院閻雙紅博士為該論文第一作者，我院黃碩教授為該論文通訊作者。此項研究得到了國家自然科學基金（項目編號：31972917, 91753108, 21675083）、江蘇省高層次創(chuàng)業(yè)創(chuàng)新人才引進計劃（個人、團體計劃）、江蘇省自然科學基金（項目編號：BK20200009）等經(jīng)費支持。

參考資料：https://chem.nju.edu.cn/33/0a/c12639a537354/page.htm