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自2019年12月以來，SARS-CoV-2病毒已經(jīng)導致全球超過1億2千萬人口感染新冠肺炎，世界各國均加大了新冠病毒疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)投入，滅活病毒疫苗因其可靠的安全性和有效性而被廣泛應(yīng)用。由于病毒培養(yǎng)液中除完整的病毒顆粒外還存在大量的雜質(zhì)，如細胞碎片、病毒缺陷顆粒、病毒空殼、蛋白聚集體和游離的核酸等，在生產(chǎn)純化過程中需要對不同組分進行快速和可靠的檢測。然而病毒和雜質(zhì)顆粒均為納米尺度，病毒濃度和純度的精確測定面臨嚴峻挑戰(zhàn)。

針對這一難題，顏曉梅教授課題組利用實驗室自主研發(fā)的納米流式檢測技術(shù)（Nano-flow cytometry, nFCM），結(jié)合病毒核酸熒光標記，通過散射和熒光信號的同時檢測，發(fā)展了病毒的單顆粒多參數(shù)定量檢測技術(shù)，實現(xiàn)了對復雜樣品中病毒濃度和純度的準確、快速測定。以粒徑僅為60 nm的T7噬菌體為例，nFCM能夠在單顆粒水平區(qū)分完整的病毒顆粒、病毒空殼和游離的病毒核酸，獲得病毒各個組分的濃度和比例。該方法成功地應(yīng)用于腺病毒載體、噬菌體雞尾酒制劑和獸用疫苗等多種病毒生物制劑的測定，并考察了病毒疫苗生產(chǎn)純化過程中病毒組分和純度的變化，實現(xiàn)了對疫苗生產(chǎn)過程的動態(tài)監(jiān)測，對疫苗的上游工藝開發(fā)具有重要的指導意義。相較于熒光定量PCR測定的病毒基因組滴度，nFCM測定的病毒物理滴度更接近空斑法測定的病毒活性滴度，并且將檢測時間從空斑法的4-10天縮短至30 分鐘。nFCM可應(yīng)用于DNA、RNA、包膜和非包膜等各類病毒的檢測，也可以對病毒表面蛋白、病毒包膜、熒光修飾的病毒等進行檢測，具有廣泛應(yīng)用前景。

該論文的共同第一作者為廈門大學化學化工學院2017級博士生牛倩和已畢業(yè)博士馬玲。該工作得到國家自然科學基金委項目(21627811、21934004和21521004)等資助。

論文鏈接：http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.202100872

參考資料

[1] 廈門大學化學化工學院,病毒單顆粒檢測技術(shù)取得重要進展,https://chem.xmu.edu.cn/info/1274/10324.htm